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β-受体激动剂是一类具有肾上腺素功能的苯乙醇胺类人工合成化合物，具有舒张气管平滑肌、减少肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒及介质的释放、降低微血管的通透性等作用。该类药物的使用剂量超过治疗剂量的5~10倍时，能对牛、猪、羊、家禽等养殖动物体内的脂肪分解代谢增强，蛋白质合成增加，能显著提高酮体的瘦肉率，改善养殖动物日增重和饲料转化率，故被形象地称为“瘦肉精”。但高剂量的药物使用容易导致在可食性动物组织中的残留，引起中毒现象。为了控制β-受体激动剂在动物养殖过程中非法滥用，确保动物产品质量安全，中国、欧盟和日本等一些国家和地区都发布了一系列法规。
本文参考最新国标GB 31658.22-2022标准，相比于以往标准的较大变化是更新了色谱柱，采用了五氟苯基柱替代常规的C18柱进行分析，采用珀金埃尔默的QSight系列液质联用系统，开发了快速高效的液相色谱-质谱联用的检测方法来准确的分析动物性食品中β-受体激动剂类化合物的残留量。
01 实验方法
样品处理
参考标准GB 31658.22-2022。
酶解与提取
称取试料2g(准确至±0.05g)，于50mL离心管内，加0.2mol/L 乙酸铵缓冲溶液6mL、β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶40μL，涡旋混匀，37℃避光水浴震荡16h，放置至室温，备用。
萃取、净化与浓缩
取备用液，加100ng/mL内标工作液100μL，涡旋混匀，8000r/min离心8min，取上清液，加0.1mol/L高氯酸溶液5mL，涡旋混匀，用高氯酸调pH至1.0±0.2，8000r/min离心8min后，将上清液用10mol/L NaOH溶液调pH至10±0.5。加乙酸乙酯15mL，中速振荡5min，5000r/min离心5min，取上层有机相。下层水相中再加入叔丁基甲醚10mL，中速振荡5min，5000r/min离心5min，取上层有机相，合并，50℃下氮气吹干，用2%甲酸溶液5mL溶解，备用。
取混合型阳离子交换固相色谱柱，依次用甲醇、2%甲酸溶液各3mL活化，取备用液过柱，依次用2%甲酸溶液、甲醇各3mL淋洗，抽干，用5%氨化甲醇溶液3mL洗脱，洗脱液在50℃下氮气吹干。
残余物中加入甲醇-0.1%甲酸溶液(10+90，V/V)0.5mL，充分溶解，过0.22μm微孔滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。
02 仪器方法
珀金埃尔默LX50 UHPLC参数
色谱柱：Kinetex 2.6μm F5 50*3.0mm
柱温：40℃
流速：0.4mL/min
进样量：5μL
表1.液相色谱梯度洗脱表
珀金埃尔默QSight 220™质谱参数
目标化合物质谱参数见下表2和表3。
表2.质谱离子源参数
表3.化合物质谱参数(点击查看大图)
03 结果谱图及结论
标准曲线
用甲醇-0.1%甲酸溶液(10+90，V/V)稀释标准曲线浓度分别为1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml和50ng/ml，含混合内标5ng/ml，拟合后的标曲如下图，R2均在0.994以上，线性较好。
图1.18种β-受体激动剂的标准曲线情况(点击查看大图)
图2考察了进样浓度为2ng/ml时，18种β-受体激动剂类化合物的提取离子谱图情况。
图2.18种β-受体激动剂的EIC提取谱图(1ng/ml，2μL)(点击查看大图)
结论 Summary
本文采用LX50-QSight 220三重四极杆液质联用系统，在电喷雾电离模式下，对动物性食品中的β-受体激动剂类化合物进行了方法的开发与测试，通过以上结果可见，该仪器具有优异的灵敏度，检出限完全满足标准的检测要求，可以轻松应对日常检测的需求，该项标准中建议使用的五氟苯基柱相比于C18柱，无论是在保留还是峰形、以及溶剂效应影响方面，都有较大改善。
珀金埃尔默的QSight系列三重四极杆液质联用系统具有HSID热表面诱导去溶剂的专利技术，使其具有优异的自清洁功能，应对该类复杂基质样品分析时，可以起到抗污染免维护的作用，大大节省了仪器的维护成本和人员工作效率的提升。
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