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1 引言：严格监管与复杂基质下的“认峰难题”
马兜铃酸(Aristolochic Acids，AAs)是一类具有显著肾毒性、遗传毒性和致癌性的天然化合物，其中马兜铃酸Ⅰ(AA-I)是备受关注的代表性成分。研究表明，马兜铃酸可引起肾小管损伤、肾间质纤维化，严重时甚至导致不可逆的肾功能损害。同时，马兜铃酸及其代谢产物还可能与DNA形成加合物，诱发基因突变，增加尿路上皮癌等恶性肿瘤的发生风险。国际癌症研究机构(IARC)已将马兜铃酸列为1类致癌物。因此，对中药材中马兜铃酸类成分进行严格监测与风险控制，是保障中药质量安全的重要环节，也是药典委及相关监管机构近年来重点关注的研究课题之一。
图1 细辛图片
2 合规护航：二极管阵列检测器或成“破局利器”
随着中药质量控制要求不断提高，马兜铃酸等风险成分的检测已不仅需要回答“含量有多少”，还需要进一步确认“检测到的究竟是不是目标成分”。传统高效液相色谱分析主要依据保留时间进行色谱峰识别，并通过峰面积实现定量。然而，中药材基质复杂、化学成分众多，部分杂质或共流出组分可能对目标峰的识别与定量结果造成干扰。因此，在实现高灵敏度、准确定量的同时，引入更加可靠的辅助定性手段，已成为提升中药材检测结果可信度的重要方向。
如何彻底打破“假阳性”与“假阴性”的困扰？《中国药典》2025年版四部通则0512《高效液相色谱法》给出了明确的技术指引——介绍了利用光谱相似度进行辅助定性分析的方法，为DAD检测器在复杂样品分析中的应用提供了规范依据。
二极管阵列检测器(DAD)能够在选定波长下进行准确定量的同时，同步采集波长范围内的全紫外吸收光谱信息，使色谱分析“由平面走向立体”。
本文采用赛默飞最新推出的Vanquish Access DAD液相色谱系统进行实验，分别检测药材和中成药中马兜铃酸成分，并通过DAD检测器的光谱分析和峰纯度评估功能进行定性分析。
图2 Vanquish Access DAD系统
色谱条件：
色谱柱：Acclaim 120 C18，5 μm, 4.6 × 250 mm (PN: 059149)
流动相：A: 乙腈, B: 0.05 % 磷酸-水，梯度洗脱
流速：1.0mL/min
柱温：35℃
检测波长：260nm，并开启3D扫描模式
表1 洗脱梯度
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3 实战验证一：单味药材检测，光谱库比对让结果“有据可依”
细辛作为传统常用中药材，其质量控制尤其需要关注马兜铃酸的潜在风险。 细辛不同药用部位中马兜铃酸的含量存在差异，通常根和根茎中的含量低于地上部分。因此，《中国药典》明确规定细辛的药用部位为根和根茎，并对马兜铃酸Ⅰ实施限量控制，通过规范药用部位与严格检测相结合的方式，降低潜在安全风险。
按照2025版《中国药典》中细辛药材马兜铃酸Ⅰ限量检查方法进行实验。结果显示，细辛供试品溶液在马兜铃酸Ⅰ对照品相应的保留时间(约33.8 min)处检出明显色谱峰。进一步提取样品目标峰与马兜铃酸Ⅰ对照品峰的光谱扫描结果并进行对比，发现光谱结果高度一致，可以判定细辛药材中检测到的组分为马兜铃酸I。
图3 细辛药材和马兜铃酸I标准品图谱
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图4 光谱对比(黑色：马兜铃酸I，红色：细辛药材)
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人工对比光谱曲线主观性强，而 Vanquish Access DAD 搭载智能光谱库检索功能，支持将标准品光谱存库。分析样品时，系统自动匹配并计算出客观的相似度匹配因子：
实测细辛药材目标峰与马兜铃酸Ⅰ对照品的光谱匹配因子高达 994.1(满分1000)。通过将光谱相似程度彻底数字化，为目标峰识别提供了直观、严谨且具说服力的合规佐证。
图5 马兜铃酸I光谱匹配结果
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4 实战验证二：复杂复方中成药，“峰纯度”打破假阳性陷阱
除含细辛的品种外，含制马兜铃等药材的复方制剂同样存在潜在风险。以止嗽化痰颗粒为例，该药由25味中药组成，化学背景极其庞杂，极易产生共流出组分干扰。
参考细辛色谱条件进行进样分析，在马兜铃酸Ⅰ对照品相近的保留时间(RT ≈ 33.8 min)处同样出现了一个明显的色谱峰(图6)！如果仅依赖保留时间判断，极易误判为马兜铃酸Ⅰ超标。
图6 止嗽化痰颗粒和马兜铃酸I标准品图谱
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提取该峰光谱进行对比后发现，其吸收特征与马兜铃酸Ⅰ存在显著差异(图7)；光谱库检索显示匹配因子仅为454.6，直接从分子光学吸收特征上排除了该峰为马兜铃酸Ⅰ的可能性。
图7 光谱结果(黑色：止嗽化痰颗粒，红色：马兜铃酸I)(点击查看大图)
与单一中药材相比，止嗽化痰颗粒的检测具有一定复杂性。该制剂由多味中药组成，含有大量不同类型的药物成分，容易产生复杂的色谱背景。在HPLC分析中，我们还需重点关注该未知峰是否包裹了痕量的马兜铃酸Ⅰ共流出？
Vanquish Access DAD 具备出色的峰纯度鉴别功能，能够对比色谱峰不同位置(前沿、顶点、后沿)的多组光谱数据并自动计算纯度因子(图8)，直观判断是否存在杂质共洗脱现象。
图8 RT=33.8min峰不同位置光谱结果对比
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分析结果显示：该未知色谱峰的纯度因子达到993(图9)，全峰光谱一致性很高，证明未发生共洗脱干扰。这一结果为“止嗽化痰颗粒样品不含马兜铃酸Ⅰ组分”提供了强有力的反向确证。
图9 止嗽化痰颗粒RT=33.8min未知峰纯度鉴别结果
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Vanquish Access DAD液相色谱一键鉴别共洗脱与基质假阳性，不仅为药品安全性提供了确凿佐证，更帮助企业省去了外送高分辨质谱排查的时间与昂贵检测成本，显著加快成品放行效率。
5 结语：让每一次放行都更有底气
中药质量安全关乎民生，面对复杂基质下的高关注风险成分，可靠的质控既要“测得准”，更要“认得准”。Vanquish Access DAD 液相色谱系统构建起“保留时间 + 3D光谱匹配 + 峰纯度鉴别”的三重防线，可以帮助中药企业客户：
1.测得准：稳定精准的定量表现，从容满足药典限量控制与日常放行；
2.认得准：强大的光谱库与峰纯度技术，告别假阳性困扰与共流出焦虑；
3.更从容：全面契合2025版药典新规，助力药企提质增效、降低质量风险！
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