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公众号：zyzhan
背景
蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)是一种常见的食源性致病菌，广泛存在于土壤、灰尘及各类食品中，其产生的蜡样芽胞杆菌呕吐毒素(Cereulide)可引发急性胃肠炎，严重时可导致败血症甚至死亡。近年来，该菌引发的食品安全事件频发：2024年国内多起盒饭、米粉集体中毒事件均与其相关，引发社会广泛关注。近期某乳企因婴幼儿配方奶粉检出蜡样芽胞杆菌呕吐毒素超标，在全球多国启动紧急召回程序，涉事产品涉及数百万罐，再次敲响食品安全警钟。婴幼儿免疫系统尚未发育完全，更易受该菌威胁，检测需求尤为迫切。传统培养法周期长、毒素鉴定能力不足，难以满足精准溯源与快速响应需求。液质联用（LC-MS/MS）技术凭借高灵敏度、强特异性和多毒素同步筛查优势，已成为蜡样芽胞杆菌呕吐毒素检测的重要手段，对保障食品安全和公共卫生防控具有重要价值。
珀金埃尔默公司基于PerkinElmer QSight 220 LC-MS/MS平台，参照《T/WSJD 57-2024食品中蜡样芽胞杆菌呕吐毒素的测定》和《ISO BS EN ISO 18465-2017标准》，建立了蜡样芽胞杆菌呕吐毒素测定的方法，为食品安全检测实验室提供一套高效、可靠、符合最新国家标准要求的高通量分析解决方案，可直接进行方法的转移，无需进行方法开发，大大提高分析效率，同时可获得优异的灵敏度，满足实验室的分析要求。
实验方法
样品制备
参考T/WSJD 57-2024食品中蜡样芽胞杆菌呕吐毒素的测定和ISO BS EN ISO 18465-2017标准。
仪器方法
珀金埃尔默LX50 UHPLC参数：
色谱柱：ACQUITY Premier Peptide BEH C18 Column, 300Å, 1.7 µm, 2.1 x 100 mm
柱温：40℃
流速：0.4 mL/min
进样量：10 μL
表1. 液相色谱梯度洗脱表
质谱参数
仪器采用珀金埃尔默QSight 220三重四极杆质谱仪，离子源参数及目标化合物质谱参数见表2和表3。
表2.质谱离子源参数
表3.蜡样芽胞杆菌呕吐毒素谱参数列表
*定性离子
结果与讨论
参考T/WSJD 57-2024食品中蜡样芽胞杆菌呕吐毒素的测定和ISO BS EN ISO 18465-2017标准，本方法采用加铵峰作为母离子，信号更好。同时，经优化后选择两个响应更好的子离子357.3和315.2，离子比率也更精准。在色谱条件方面，考虑到蜡样芽胞杆菌呕吐毒素的属于亲脂性的环状十二肽，分子量较大，极性相对较弱，使用常规的C18色谱柱出峰较晚且峰型宽，进而选择更适合多肽分析的孔径300 Å Peptide BEH C18色谱柱。在流动相方面，流动相水相中加了0.1%甲酸+10 mM醋酸铵，提高母离子加铵峰的信号强度和稳定性。针对可能的进样高浓度后的交叉污染，本方法选择了甲醇/异丙醇(1:1)作为强洗溶剂和甲醇/水(1:1)作为弱洗溶剂，这样强弱交替清洗保证了空白溶剂中不受任何影响。
图1中展示了0.1ppb时蜡样芽胞杆菌呕吐毒素和内标的提取离子谱图，质谱超快的采集速度保证每个色谱峰上有足够的采集点数，以便获得准确的结果及优异的重复性，QSight优异的HSID高温诱导去溶剂技术和低噪音的检测器技术保证了空白样品中超低的背景噪音，使得本方法的检出限远远优于相关标准中的监测要求。
图1.蜡样芽胞杆菌呕吐毒素和内标的提取离子谱图(点击查看大图)
稀释蜡样芽胞杆菌呕吐毒素混合标准溶液，制成0.1ng/mL–100 ng/mL的系列校准标准溶液，并绘制标准曲线，采用内标法进行定量分析。图2为待测化合物的标准曲线情况，在线性范围内，线性关系均较好，相关系数R²大于0.99。
图2.蜡样芽胞杆菌呕吐毒素的标准曲线情况(点击查看大图)
结论
本文采用LX50 UHPLC-QSight 220三重四极杆液质联用系统建立了快速、高灵敏度和可靠的LC-MS/MS实验方法测定食品中蜡样芽胞杆菌呕吐毒素，提供了可靠的高通量检测手段，且检出限远远低于标准中的检出限要求，同时数据显示，其重复性和线性均较好，为后期高通量样品的测定提供可靠的保障。
珀金埃尔默的QSight三重四极杆液质联用系统具有其独特的HSID高温诱导去溶剂自清洁技术，应对各种复杂的样品基质，无需清洗维护，即可完成大量样品分析，大大节省维护时间及成本。
参考文献
1. T/WSJD 57-2024食品中呕吐毒素的测定
2. ISO BS EN ISO 18465-2017标准
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