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多肽及核酸类药物
多肽类药物和核酸类药物凭借其独特的药理作用和广阔的市场前景，成为当前医药市场的两大热门细分领域。随着我国鼓励创新药研发相关政策的出台，未来会有更多的具有显著临床效果的多肽与核酸类创新药和仿制药获批上市。多肽与核酸类药物具备无限的潜力。赛默飞TSQ Plus系列三重四极杆液质联用仪以其出色的定量能力，能为多肽与核酸类药物的定量检测提供保障。下边本作者将从多肽及核酸类药物应用案例出发来介绍。
TSQ Quantis Plus
TSQ Altis Plus
TSQ Plus系列三重四极杆质谱
多肽药物作为一种新兴的治疗手段，不仅具有高活性和强选择性，能精准靶向疾病相关受体。而且在免疫原性方面相对较低，减少了不必要的免疫反应。司美格鲁肽能够有效控制血糖水平，抑制肠蠕动、增加饱腹感，抑制食欲。近年来成为肥胖患者的新宠。本节应用方案建立了血浆中司美格鲁肽的检测方法。
司美格鲁肽4电荷态下TSQ Plus系列质谱优化界面(注意电荷量)
实验中采用1:3乙腈蛋白沉淀后直接进样的前处理方式，进样5μL，灵敏度良好，线性1ng/mL-500ng/mL线性关系良好，两种电荷态下司美格鲁肽线性判定系数r2均在0.996以上。各校正点偏差均在10%以内。1ng/mL血浆样品经蛋白沉淀处理后6针稳定性RSD为3.67%。
5ng/mL的实际浓度样品4电荷下特征谱图
5ng/mL的实际浓度样品3电荷下特征谱图
实验中建立了LCMS联用检测血浆中的司美格鲁肽的分析方法，LOQ实际浓度达到1ng/mL进样5μL。
在多肽药物发展的同时，核酸药物的发展也备受关注。核酸类药物从源头干预疾病发生发展，成为近年来医药领域的研究热点。本节小作者采用实际核酸样品在TSQ Plus系列质谱上测试实验为例来阐述。某4电荷的核酸在2ng/mL血浆中经液液萃取后，实际浓度0.4ng/mL进样5μL，信噪比等于38.6，满足定量需求，6针稳定性良好，RSD在4%以内。
某4电荷的核酸2ng/mL(实际浓度0.4ng/mL)血浆加标样特征谱图
核酸2ng/mL-1000ng/mL(实际浓度0.4ng/mL-200ng/mL)血浆加标样标曲，判定系数r2=0.9993，各点偏差在10%以内。
多肽核酸药物分析方法开发
注意事项分享
注意事项分享
色谱方法开发注意事项：
多肽及核酸为两性物质，极性比较大，保留相对较弱，且很容易在色谱柱残留(用含有0.4-1%甲酸的常规洗针液洗针)；多肽及核酸的分子量比较大，因此常规用于小分子的色谱柱(孔径120Å ) 并不适合多肽分析，需要用300Å；多肽在新的色谱柱上很容易发生吸附现象，导致峰形差，需要对色谱柱进行钝化处理(包括在流动相中加万分之一的血浆或者白蛋白)。
前处理注意事项：
无法像小分子,找到一种合适的前处理方法。蛋白沉淀法几乎使得目标肽一起沉淀，特别是分子量较大时(大于一万的将不适合蛋白沉淀的前处理);液液萃取可能无法提取出目标肽或核酸(需要用SPE或者超滤等方式)。
多肽及核酸药物容易发生非特异性吸附：
蛋白沉淀上清液，N2挥干造成多肽的损失；多肽及核酸标曲配制过程中的非特异性吸附(选择合适的枪头及容器)。
质谱SRM采集方法开发注意事项：
大多数多肽及核酸很难找到特征性的碎片离子，低能量下，没有碎片离子生成，而高能量下又生成很多小的碎片离子；此时可以运用SRM的母离子进行定量或者SIM模式下抽提高响应电荷态离子流来进行定量。此时也同样具备高的专属性；多肽及核酸在进行碎裂时，往往会产生很多响应很高但特异性不好的亚铵离子，这些离子会干扰SRM抽提离子通道的选择，尽量不选择低于200以下的，这些离子的通道的特异性差会有较高的背景干扰。
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